El método está basado en la hidrólisis del a-Naftil fosfato a pH 5,0 por acción de la fosfatasa ácida (FAC) produciéndose a-naftol y fosfato inorgánico. El pentanodiol actua como aceptor del fosfato aumentando la sensibilidad de la reacción.El a-naftol reacciona con una sal de diazonio, Fast Red TR*, formándose un complejo coloreado directamente proporcional a la actividad de la FAC presente en la muestra.